Biological evaluation of medical devices – Part 5: Tests for in vitro cytotoxicity (ISO 10993-5:2009)
Abstract
ISO 10993-5:2009 describes test methods to assess the in vitro cytotoxicity of medical devices.
These methods specify the incubation of cultured cells in contact with a device and/or extracts of a device either directly or through diffusion.
These methods are designed to determine the biological response of mammalian cells in vitro using appropriate biological parameters.
DIN EN ISO 10993-5:2009-10 (D)
Biologische Beurteilung von Medizinprodukten – Teil 5: Prüfungen auf In-vitro-
Zytotoxizität (ISO 10993-5:2009); Deutsche Fassung EN ISO 10993-5:2009
Inhalt Seite
Vorwort …………………………………………………………………………………………………………………………………………….5
Einleitung …………………………………………………………………………………………………………………………………………7
1 Anwendungsbereich ……………………………………………………………………………………………………………..8
2 Normative Verweisungen ………………………………………………………………………………………………………9
3 Begriffe …………………………………………………………………………………………………………………………………9
4 Vorbereitung von Proben und Kontrollen……………………………………………………………………………..10
4.1 Allgemeines ………………………………………………………………………………………………………………………..10
4.2 Herstellung flüssiger Extrakte des Materials ………………………………………………………………………..10
4.2.1 Grundsätze der Extraktion …………………………………………………………………………………………………..10
4.2.2 Extraktionsmedium ……………………………………………………………………………………………………………..11
4.2.3 Extraktionsbedingungen ……………………………………………………………………………………………………..11
4.3 Materialvorbereitung für Prüfungen mit direktem Kontakt…………………………………………………….12
4.3.1 Form der Prüfmuster……………………………………………………………………………………………………………12
4.3.2 Sterilität von Prüfmustern ……………………………………………………………………………………………………12
4.3.3 Flüssige Prüfmuster…………………………………………………………………………………………………………….12
4.3.4 Absorbierende Prüfmuster…………………………………………………………………………………………………..13
4.4 Vorbereitung von Kontrollen………………………………………………………………………………………………..13
5 Zelllinien ……………………………………………………………………………………………………………………………..13
6 Kulturmedium ……………………………………………………………………………………………………………………..13
7 Vorbereitung der Zellstammkultur………………………………………………………………………………………..14
8 Prüfverfahren………………………………………………………………………………………………………………………14
8.1 Anzahl der Parallelproben ……………………………………………………………………………………………………14
8.2 Prüfung an Extrakten …………………………………………………………………………………………………………..14
8.3 Prüfung durch direkten Kontakt …………………………………………………………………………………………..15
8.4 Prüfung durch indirekten Kontakt ………………………………………………………………………………………..16
8.4.1 Agardiffusion ………………………………………………………………………………………………………………………16
8.4.2 Filterdiffusion………………………………………………………………………………………………………………………17
8.5 Bestimmung der Zytotoxizität………………………………………………………………………………………………17
9 Prüfbericht ………………………………………………………………………………………………………………………….19
10 Beurteilung der Ergebnisse …………………………………………………………………………………………………19
Anhang A (informativ) Zytotoxizitätsprüfung durch Aufnahme von Neutralrot …………………………………..21
A.1 Allgemeines ………………………………………………………………………………………………………………………..21
A.2 Versuchsdurchführung………………………………………………………………………………………………………..21
A.2.1 Grundlegendes Verfahren ……………………………………………………………………………………………………21
A.2.2 Material ……………………………………………………………………………………………………………………………….21
A.2.3 Verfahren…………………………………………………………………………………………………………………………….24
A.2.4 Datenanalyse ………………………………………………………………………………………………………………………27
Anhang B (informativ) Zytotoxizitätsprüfung mittels Zellkoloniebildung……………………………………………28
B.1 Allgemeines ………………………………………………………………………………………………………………………..28
B.2 Versuchsdurchführung………………………………………………………………………………………………………..28
B.2.1 Grundlegendes Verfahren ……………………………………………………………………………………………………28
B.2.2 Material ……………………………………………………………………………………………………………………………….28
B.2.3 Verfahren…………………………………………………………………………………………………………………………….30
B.2.4 Prüfbericht ………………………………………………………………………………………………………………………….32
Anhang C (informativ) Zytotoxizitätsprüfung mit MTT……………………………………………………………………….33
C.1 Allgemeines…………………………………………………………………………………………………………………………33
C.2 Versuchsdurchführung ………………………………………………………………………………………………………..33
C.2.1 Grundlegendes Verfahren…………………………………………………………………………………………………….33
C.2.2 Material ……………………………………………………………………………………………………………………………….33
C.2.3 Verfahren …………………………………………………………………………………………………………………………….35
C.2.4 Datenaufzeichnung………………………………………………………………………………………………………………37
C.2.5 Datenanalyse……………………………………………………………………………………………………………………….37
Anhang D (informativ) Zytotoxizitätsprüfung mit XTT………………………………………………………………………..38
D.1 Allgemeines…………………………………………………………………………………………………………………………38
D.2 Versuchsdurchführung ………………………………………………………………………………………………………..38
D.2.1 Grundlegendes Verfahren…………………………………………………………………………………………………….38
D.2.2 Material ……………………………………………………………………………………………………………………………….38
D.2.3 Verfahren …………………………………………………………………………………………………………………………….40
D.2.4 Datenaufzeichnung………………………………………………………………………………………………………………42
D.2.5 Datenanalyse……………………………………………………………………………………………………………………….42
Anhang ZA (informativ) Zusammenhang zwischen dieser Europäischen Norm und den
grundlegenden Anforderungen der EG-Richtlinie 93/42/EWG………………………………………………..43
Anhang ZB (informativ) Zusammenhang zwischen dieser Europäischen Norm und den
grundlegenden Anforderungen der EG-Richtlinie 90/385/EWG………………………………………………44
Literaturhinweise …………………………………………………………………………………………………………………………….45